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일본뇌염 백신 후보물질의 효능평가를 위한 조직 병변 분석

 1. 사업명 : (일반용역) 일본뇌염 백신 후보물질의 효능평가를 위한 조직 병변 분석

2. 목적 및 필요성

○ 목 적

   - 일본뇌염은 일본뇌염 매개 모기에 의해 전파되는 인수공통 감염병으로, 매년 동아시안 및 동남아 지역을 위주로 지속해서 발생하고 있음

   - 허가 백신은 G3 유전형을 기반으로 개발되었으며 최근 재유행 가능성이 보고 되는 G5 유전형에 대해서는 효능이 떨어진다는 연구가 보고되고 있음. 이에 따라 다양한 유전형의 일본뇌염 바이러스에 효과 있는 백신을 개발하고자 함

○ 필요성

   - 일본뇌염 백신 후보물질의 효능평가를 위해 공격 접종 후 조직 병변을 확인하는 것이 중요함. 이를 위해 H&E 염색을 통해 전반적인 조직 병변을 관찰하고 TUNEL assay로 세포 사멸 여부를 확인하며, Nissl 염색으로 신경 세포 손상을 평가함으로써 백신의 신경 보호 효과를 평가하고자 함  

3. 용역기간 및 예산

○ 기 간 : 계약일로부터 ~ 2024.12.20.

○ 예 산 : 19,734,000원(부가세 포함)  

4. 사업수행체계

5. 사업 내용

가. 주요 사업 내용

   ○ 일본뇌염 백신 후보물질을 면역 후 공격 접종한 마우스 뇌 조직(60건) 제공

     - 공격 접종 후 적출한 뇌 조직을 중성 완충 포르말린에 고정하여 제공

   ○ 발주부서에서 제공한 뇌 조직의 파라핀 블록 및 슬라이드 제작, 조직 병변, 세포 사멸, 신경독성 수준 분석

나. 과업 내용 및 추진전략

   ○ 샘플 제공(발주부서)

     - 60건의 뇌 조직을 중성 완충 포르말린에 고정하여 제공

   ○ 파라핀 블록 및 슬라이드 제작(수행기관)

     - 뇌 조직당 1개의 파라핀 블록 제작

     - 발주부서에서 제공한 포르말린에 고정된 뇌 조직 표본 제작에 적합한 크기로 방향 및 두께를 설정하여 삭정

      * 파라핀 블록당 3개씩 슬라이드 제작하여 총 180 슬라이드 제작

      * 방향 및 두께는 발수부서와 협의 후 진행

     - 삭정한 검체는 카세트에 넣어 13시간 이상 조직처리 실시 및 슬라이드 제작

     - 건조 후 탈 파라핀, 함수과정을 거쳐 증류수로 세척, Hematoxylin & Eosin 염색실시

   ○ Hematoxylin & Eosin 염색(수행기관)

     - Hematoylin 처리 후 증류수 세척

     - Eosin 처리 후 함수과정을 거쳐 증류수로 세척

   ○ H&E염색 슬라이드 사진 촬영 및 일본뇌염 바이러스 특이 병변 판독(수행기관)

     - 샘플당 H&E 염색 슬라이드 3장 사진 및 판독을 통해 전체 면적 당 염증 부위 면적 분석 및 병변 판독 결과(scoring 데이터) 제공

     - 각 슬라이드 이미지 결과 및 병변 분석 최종 결과 보고서 제공

   ○ 세포 사멸도 측정(TUNEL assay)(수행기관)

     - 제작된 파라핀 블록으로부터 TUNEL assay 용 슬라이드 제작

     * 슬라이드 제작 부위는 발수부서와 협의 후 진행

     - Triton X-100 및 Proteinase K 처리하여 세포투과화

     - TdT(Teminal deoxynucleotidyl transferase) 효소와 염색 시약을 처리하여 조직 내 DNA 단편화 검출 등 세포 사멸 부분 표지 및 scoring data 포함한 세포 사멸 정도 분석

   ○ 신경독성 측정(Nissl assay)(수행기관)

     - 제작된 파라핀 블록으로부터 Nissl assay 용 슬라이드 제작

     * 슬라이드 제작 부위는 발수부서와 협의 후 진행

     - Nissl 염료(cresyl violet, toluidine blue 등)로 염색하여 뉴런의 세포체 염색

     - 염색 후 분별, 탈수 및 투명화 과정을 거쳐 마운팅한 후 뉴런의 구조를 분석하여 scoring data 포함한 신경 손상 정도 분석

   ○ 결과 보고서 작성(수행기관)

     - 단계별 실험방법 및 결과에 대한 보고서 작성

     * H&E 염색 분석수(180건), TUNEL assay 분석(60건), Nissl assay 분석(60건) 분석 결과 포함한 보고서 제출

다. 추진체계

   ○ 발주부서(감염병백신연구과)

    - 포르말린에 고정된 조직 제공

    - 단계별 방법 절차 확인, 진행 상황 점검, 최종 결과물 확인

   ○ 과업수행기관

    - 샘플 제공 후 중간 진도 보고 및 최종 결과 보고서 제공

    - 실험 조건 관련 사전 협의 후 진행

라. 과제수행 시 요구사항

   ○ 최종 결과 보고서 내 실험 결과 등을 활용하여 특허 및 논문 투고 계획으로 실험 재료, 방법, 결과에 대해 자세히 작성하며 최종 결과 보고서 제출 시 원본 데이터는 전자파일로 별도 제출

   ○ 과업내용 중 각 항목의 단가에 맞춰 수량은 상호 협의를 통해 변경 가능하며, 전체 계약금 변동 없이 조정 가능

   ○ 계약된 용역 업체가 직접 수행해야함(하도급 불가)

   ○ 사업 수행에 필요한 전반적인 추진 상황 및 변경 사항 발생 시 발주부서와 사전 논의

   ○ 과제수행 단계별, 특이 사항 보고

6. 사업관리

가. 추진일정

나. 보고서 등 제출

   ○ 분석 의뢰 슬라이드 제출

     - H&E 분석용 슬라이드 180건, TUNEL 및 Nissl 분석용 슬라이드 60건 발주부서에 제출

   ○ H&E염색 슬라이드 당 사진(1장) 및 일본뇌염 바이러스 특이 병변 판독 결과(scoring 데이터) 제출

     - 슬라이드 판독 180건에 대한 슬라이드 이미지 및 scoring 데이터

   ○ 세포 사멸도 및 신경독성 분석

     - 60건에 대한 슬라이드 이미지 및 판독 결과

   ○ 단계별 실험방법과 결과물 분석 및 평가 결과 자료가 포함된 최종보고서(전자파일) 제출

※ 자격 요건

   ○ 계약방법: 입찰

   ○ 참가자격: 「국가종합전자조달시스템 입찰참가자격등록규정」에 따라 입찰(개찰)일 전일까지 나라장터에 학술연구용역[업종코드 1169]으로 모두 등록된 업체로 입찰참가 등록한 자

   ○ 조직절편기 또는 생체박절기 등의 조직절편 제작·분석에 필요한 장비 및 연구시설*을 보유한 자

     * 발주부서 요청 시 장비 및 연구시설 보유를 증명할 수 있어야 함

     ※ 제시된 과업을 단독으로 수행이 가능한 사업자(공동수급 및 하도급 불가)

     ※「중소기업기본법」제2조에 따른 소기업자 및「소상공인 보호 및 지원에 관한 법률」제2조에 따른 소상공인으로서「중소기업 범위 및 확인에 관한 규정」에 따라 발급된 <소기업·소상공인 확인서>를 소지한 자

...................(계속)

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